轉化酶活性檢測 抑制劑濃度分析化驗
轉化酶為淡黃色至褐色粉末,可溶于水,不溶于乙醇,有較強吸濕性。也可是淡黃色微黏稠液體。主要作用為使蔗糖水解為葡萄糖和果糖(轉化糖)。同時改變其旋光性。轉化酶主要使蔗糖分解成轉化糖,從而得到比蔗糖的溶解度更高、不易有糖結晶析出的高濃度糖液,用于冰淇淋、巧克力、蜜餞、各種糖果、果醬等中。亦用于生產人造蜂蜜及從食品中除去蔗糖。下面就將對轉化酶的檢測進行詳細介紹。
關于轉化酶,可對其提供酶活性檢測、分析化驗、含量檢測、濃度檢測、成分分析、定性定量檢測、未知物分析鑒定、酶底物、產物濃度、pH值、溫度、抑制劑濃度、共同刺激物、離子濃度、濃度效應、酶抗體等檢測項目。
同時可對蔗糖轉化酶、乙醇轉化酶、C3轉化酶、酸性轉化酶、蜂蜜轉化酶、脫脂轉化酶等進行檢測。
轉化酶的測定方法主要包括間苯二酚比色法和二硝基水楊酸法。
1、間苯二酚比色法是一種常用的轉化酶測定方法。該方法涉及以下幾個步驟:
a.樣品提取:將實驗材料(如植物葉片或種子)磨碎后,在110℃烘箱中烘15min,然后調制70℃烘干至恒重。取50mg樣品倒入10ml刻度離心管內,加入4ml 80%乙醇,在80℃水浴中不斷攪拌40min,離心后收集上清液,其殘渣加2ml 80%乙醇重復提取2次,合并上清液。最后,用80%乙醇定容至10ml,過濾后得到濾液用于測定。
b.制作標準曲線:取蔗糖標準液用80%乙醇稀釋成系列濃度的溶液(如0、10、20、30、40、60、80、100ug/ml)。分別取0.4ml溶液,加入200ul 2mol/L NaOH,100℃煮沸5min,冷卻后加入2.8ml 30%HCl和0.8ml 0.1%間苯二酚,搖勻后在80℃水浴反映10min,冷卻后再480nm測定OD值,以0濃度管調零。繪制蔗糖濃度-OD值曲線。
c.顯色測定:取提取液0.4ml,按上述步驟進行蔗糖含量的測定,讀取OD值,并從標準曲線得到提取液中的糖含量,然后再計算樣品中的轉化酶含量。
2、二硝基水楊酸法也是一種測定轉化酶活性的方法,該方法通過測量還原糖與二硝基水楊酸反應產生的顏色變化來定量轉化酶的活性。具體步驟包括在特定條件下使轉化酶與蔗糖反應,然后使用光度計在540nm波長下測定光密度值,通過比較樣品與標準曲線的吸光度來確定轉化酶的活性。
這些方法提供了測定轉化酶活性和含量的有效手段,適用于不同領域的研究和應用。
1、GB/T 40152-2021 蜂蜜中蔗糖轉化酶的測定 分光光度法
2、DIN 10759:2016-12 蜂蜜分析.蔗糖酶活性的測定.西根塔勒法
3、T/NAIA 010-2020 土壤蔗糖酶活性的測定 3,5-二硝基水楊酸比色法
4、DIN 10759:2016 蜂蜜的分析研究.蔗糖酶活性的測定.西根哈勒法
5、BS EN 12146:1997 水果汁和蔬菜汁.蔗糖的酶素測定.NADP分光光度測量法
6、DIN 10759 E:2015-10 蜂蜜的分析研究 蔗糖酶活性的測定 西根哈勒法
7、T/GXAS 054-2020 糖料甘蔗蔗汁糖度、蔗糖分試驗方法
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